人工栽培天麻,在有性繁殖過程中,需要萌發(fā)菌和蜜環(huán)菌兩種共生菌。筆者在生產(chǎn)實踐中,摸索出兩種共生菌都能生長的培養(yǎng)基及生產(chǎn)技術(shù)。具體做法如下。
1 培養(yǎng)基配制
1.1 液體培養(yǎng)基 馬鈴薯(挖去芽眼、去皮、切片)100g,硬雜木屑、麥麩、玉米面各50g,自來水或天然水1300mL,在雙重鍋內(nèi)煮沸30分鐘后用雙層紗布過濾。取濾液補水至1000mL,加葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、蛋白胨0.5%、10mLVB1。全部溶解搖均后,分裝于500mL的三角瓶或罐頭瓶內(nèi),每瓶裝150mL左右,也可裝于試管內(nèi),裝入量為試管容積的1/4。三角瓶和試管用棉花塞口,罐頭瓶用2層牛皮紙或4層報紙上蓋一層塑料布封口后,用皮筋扎口。特點:技術(shù)含量高,繁殖快,長好即可應(yīng)用,但不能長期保存。
1.2 固體斜面培養(yǎng)基 是食用菌生產(chǎn)中常用的培養(yǎng)基,按照“1.1”的操作程序制取濾液,在濾液中加入瓊脂18g,加熱溶化并補水至1000mL,趁熱加入葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、蛋白胨5g、10mgVB1,全部溶解搖均,分裝于試管內(nèi),裝量為試管容量的1/4,然后用棉花塞口。
1.3 木屑培養(yǎng)基 硬雜木屑50%、玉米芯(粉碎成小顆粒狀)25%、麥麩15%、玉米面10%,外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%、石灰0.5%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.1%、2%VB1。將原料和石膏、石灰等干料拌均,再將上述可溶解的所有輔料溶于水中并拌入原料中,使之含水量為70%,充分拌均后裝入試管,并適當(dāng)壓實。裝入量為試管容積的1/2,然后用棉花塞口。特點:耐貯藏,便于郵寄。
2 滅菌
用手提式高壓滅菌鍋,也可用民用高壓鍋代替。
2.1 液體和斜面固體培養(yǎng)基 滅菌時,蒸汽壓力為1.4kg/平方厘米時穩(wěn)定保持30分鐘,待鍋內(nèi)溫度降到50~70℃時出鍋。液體培養(yǎng)基出鍋后直接放入接種箱中,待溫度降到25℃以下時接種;斜面固體培養(yǎng)基需趁液體狀態(tài)時傾斜成斜面(斜面長度約占試管長的3/5),待培養(yǎng)基自然凝固后移入接種箱。
2.2木屑培養(yǎng)基 滅菌時,蒸汽壓力在1.4kg/平方厘米時穩(wěn)定保持45~60分鐘,自然降溫后,出鍋直接放入接種箱。
注意:滅菌鍋應(yīng)事先加足水,開鍋后一定要待內(nèi)部冷空氣排盡后再壓閥,達(dá)到壓力后,調(diào)小熱源,維持壓力。滅好菌后,降壓不能過急,以防沖掉棉塞。
3 接種
必須在無菌條件下,嚴(yán)格按照無菌操作要求進(jìn)行。
3.1 接種液體培養(yǎng)基 只需從母種試管內(nèi)挑取花生米大小的1~2塊母種(帶有菌絲的種塊)接入三角瓶中。接入試管液體培養(yǎng)基時,種塊可小一些。
3.2 接種斜面培養(yǎng)基 蜜環(huán)菌需趁斜面有凝結(jié)水時接種,凝結(jié)水有利于蜜環(huán)菌萌發(fā)。每支試管斜面上接入1~3塊母種;接種萌發(fā)菌時,需待培養(yǎng)基表面無凝結(jié)水時再接種。每支試管斜面上接入1~2塊母種。
3.3 木屑培養(yǎng)基 培養(yǎng)基滅菌后不能存放,需盡快接種。接種時,要用接菌鉤適度推壓種塊,使其與培養(yǎng)基緊密接觸,以利菌種萌發(fā)生長,接種后需立放。
4 培養(yǎng)
接種后,盡快放入恒溫箱或培養(yǎng)室內(nèi),在22~24℃的條件下恒溫培養(yǎng)。
4.1 液體種 在培養(yǎng)過程中,從第2天開始啟動搖床振蕩培養(yǎng);手工操作時,每天需手工搖動6~8次。如果是試管裝,搖動后需斜放,7天左右即可終止培養(yǎng)(萌發(fā)菌比蜜環(huán)菌的培養(yǎng)時間要多2~3天),應(yīng)盡快用于生產(chǎn)。成熟的培養(yǎng)液應(yīng)是清澈透明、淡茶色或土黃色。如果渾濁、液面膜狀或呈大量泡沫狀即是雜菌污染,應(yīng)廢掉。
4.2 斜面種 培養(yǎng)時需平放,48小時左右可看出菌絲萌動并逐漸向周圍輻射延伸。當(dāng)10~15天菌絲貫穿斜面培養(yǎng)基(萌發(fā)菌培養(yǎng)時間需長一些)時即可用于生產(chǎn)。置于0~4℃的冰箱內(nèi),蜜環(huán)菌可保存40天,萌發(fā)菌可保存60天。
4.3 木屑種 接種后需豎立放置培養(yǎng),防止種塊振動,經(jīng)15~20天培養(yǎng),蜜環(huán)菌菌索或萌發(fā)菌菌絲貫穿到瓶底時,即可用于生產(chǎn)。置于0~4℃的冰箱內(nèi)保存,6個月質(zhì)量不變。經(jīng)冰箱內(nèi)久存的木屑菌種用于生產(chǎn)時,為防止接種時感染雜菌,可從試管底部破管取種接種。
1 培養(yǎng)基配制
1.1 液體培養(yǎng)基 馬鈴薯(挖去芽眼、去皮、切片)100g,硬雜木屑、麥麩、玉米面各50g,自來水或天然水1300mL,在雙重鍋內(nèi)煮沸30分鐘后用雙層紗布過濾。取濾液補水至1000mL,加葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、蛋白胨0.5%、10mLVB1。全部溶解搖均后,分裝于500mL的三角瓶或罐頭瓶內(nèi),每瓶裝150mL左右,也可裝于試管內(nèi),裝入量為試管容積的1/4。三角瓶和試管用棉花塞口,罐頭瓶用2層牛皮紙或4層報紙上蓋一層塑料布封口后,用皮筋扎口。特點:技術(shù)含量高,繁殖快,長好即可應(yīng)用,但不能長期保存。
1.2 固體斜面培養(yǎng)基 是食用菌生產(chǎn)中常用的培養(yǎng)基,按照“1.1”的操作程序制取濾液,在濾液中加入瓊脂18g,加熱溶化并補水至1000mL,趁熱加入葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、蛋白胨5g、10mgVB1,全部溶解搖均,分裝于試管內(nèi),裝量為試管容量的1/4,然后用棉花塞口。
1.3 木屑培養(yǎng)基 硬雜木屑50%、玉米芯(粉碎成小顆粒狀)25%、麥麩15%、玉米面10%,外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%、石灰0.5%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.1%、2%VB1。將原料和石膏、石灰等干料拌均,再將上述可溶解的所有輔料溶于水中并拌入原料中,使之含水量為70%,充分拌均后裝入試管,并適當(dāng)壓實。裝入量為試管容積的1/2,然后用棉花塞口。特點:耐貯藏,便于郵寄。
2 滅菌
用手提式高壓滅菌鍋,也可用民用高壓鍋代替。
2.1 液體和斜面固體培養(yǎng)基 滅菌時,蒸汽壓力為1.4kg/平方厘米時穩(wěn)定保持30分鐘,待鍋內(nèi)溫度降到50~70℃時出鍋。液體培養(yǎng)基出鍋后直接放入接種箱中,待溫度降到25℃以下時接種;斜面固體培養(yǎng)基需趁液體狀態(tài)時傾斜成斜面(斜面長度約占試管長的3/5),待培養(yǎng)基自然凝固后移入接種箱。
2.2木屑培養(yǎng)基 滅菌時,蒸汽壓力在1.4kg/平方厘米時穩(wěn)定保持45~60分鐘,自然降溫后,出鍋直接放入接種箱。
注意:滅菌鍋應(yīng)事先加足水,開鍋后一定要待內(nèi)部冷空氣排盡后再壓閥,達(dá)到壓力后,調(diào)小熱源,維持壓力。滅好菌后,降壓不能過急,以防沖掉棉塞。
3 接種
必須在無菌條件下,嚴(yán)格按照無菌操作要求進(jìn)行。
3.1 接種液體培養(yǎng)基 只需從母種試管內(nèi)挑取花生米大小的1~2塊母種(帶有菌絲的種塊)接入三角瓶中。接入試管液體培養(yǎng)基時,種塊可小一些。
3.2 接種斜面培養(yǎng)基 蜜環(huán)菌需趁斜面有凝結(jié)水時接種,凝結(jié)水有利于蜜環(huán)菌萌發(fā)。每支試管斜面上接入1~3塊母種;接種萌發(fā)菌時,需待培養(yǎng)基表面無凝結(jié)水時再接種。每支試管斜面上接入1~2塊母種。
3.3 木屑培養(yǎng)基 培養(yǎng)基滅菌后不能存放,需盡快接種。接種時,要用接菌鉤適度推壓種塊,使其與培養(yǎng)基緊密接觸,以利菌種萌發(fā)生長,接種后需立放。
4 培養(yǎng)
接種后,盡快放入恒溫箱或培養(yǎng)室內(nèi),在22~24℃的條件下恒溫培養(yǎng)。
4.1 液體種 在培養(yǎng)過程中,從第2天開始啟動搖床振蕩培養(yǎng);手工操作時,每天需手工搖動6~8次。如果是試管裝,搖動后需斜放,7天左右即可終止培養(yǎng)(萌發(fā)菌比蜜環(huán)菌的培養(yǎng)時間要多2~3天),應(yīng)盡快用于生產(chǎn)。成熟的培養(yǎng)液應(yīng)是清澈透明、淡茶色或土黃色。如果渾濁、液面膜狀或呈大量泡沫狀即是雜菌污染,應(yīng)廢掉。
4.2 斜面種 培養(yǎng)時需平放,48小時左右可看出菌絲萌動并逐漸向周圍輻射延伸。當(dāng)10~15天菌絲貫穿斜面培養(yǎng)基(萌發(fā)菌培養(yǎng)時間需長一些)時即可用于生產(chǎn)。置于0~4℃的冰箱內(nèi),蜜環(huán)菌可保存40天,萌發(fā)菌可保存60天。
4.3 木屑種 接種后需豎立放置培養(yǎng),防止種塊振動,經(jīng)15~20天培養(yǎng),蜜環(huán)菌菌索或萌發(fā)菌菌絲貫穿到瓶底時,即可用于生產(chǎn)。置于0~4℃的冰箱內(nèi)保存,6個月質(zhì)量不變。經(jīng)冰箱內(nèi)久存的木屑菌種用于生產(chǎn)時,為防止接種時感染雜菌,可從試管底部破管取種接種。