操作要點：①取新鮮毛蚶肉，蒸煮后絞碎，與其澄清后的煮汁一并使用，用硫酸調(diào)節(jié)至pH 2.5，煮沸0.5小時左右，濾去沉淀物。②向濾液中加1％的活性炭，攪拌2小時，濾去清液，濾液再用活性炭吸附1次，合并兩次經(jīng)過吸附的活性炭，加入2倍量的酸水攪拌15分鐘，除去沾在活性炭上的雜質。濾去液體，用碳酸鈉調(diào)節(jié)至pH 9.5，再加入1％的亞硝酸鈉，加熱攪拌2小時過濾。③洗脫液中加入1％亞硝酸鈉和20％正丁醇不斷攪拌，同時加熱至60～70℃保持2小時，如溶液有大量蛋白質析出，將析出蛋白質濾去，再加入硫酸銨至飽和，攪拌并加熱至65～75℃保持1小時。④靜置，待液體分層后，分出正丁醇溶液，再用鹽酸調(diào)節(jié)至pH 2.5，然后用0.1摩／升鹽酸提取7～8次，將抽提液用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH為4.5～5.0。⑤將上述溶液用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH 8.5，在通風櫥中緩慢加入0.7％氰化物，攪拌均勻后，置于暗處約5小時，氰化即可完成。⑥向氰化液中加入食鹽，使溶液呈飽和狀態(tài)，用酚-丁醇混合液抽提數(shù)次。二氰絡合物即溶解于有機溶劑層。抽提液中加入等量三氯甲烷，充分攪拌，并用蒸餾水抽提。再在水抽提液中加入四氯化碳和蒸餾水抽提。最后水抽提液用乙醚洗滌，即得到較純的玫瑰紅溶液。⑦將兩倍體積的丙酮加入活化后的氧化鋁攪拌，靜置。待氧化鋁沉降傾出上層丙酮，另加入1倍體積丙酮，倒入層析柱中。向濃維生素B12溶液中加入3倍體積的純丙酮混合均勻后，灌人層析柱。待全部溶液通過后，再以80％丙酮溶液洗滌吸附柱。在沖洗過程中，層析柱上即分離出不同顏色環(huán)，最上一環(huán)為黃褐色，第二環(huán)為橙紅色，最下一環(huán)為桃紅色，即為維生素B12。隨著時間的延長，各環(huán)的分離也愈完全。在桃紅色環(huán)降至層析柱2／3處時，改用50％丙酮水溶液洗脫，收集桃紅色洗脫液，在水溶鍋中加熱濃縮至原體積的1／8。⑧在濃縮液中加入10倍量純丙酮混合均勻，把溶液置于5℃冷庫中放置2天，維生素B12 即逐漸結晶成玫瑰紅色的針狀或棱柱狀的晶體，待母液的紅色極淡時，倒出母液，用丙酮洗滌結晶數(shù)次，再用乙醚洗滌，在真空干燥箱中避光干燥。
