感觀檢查
將購買的玉米直接堆放在新蓋平房的水泥地面上,開包檢查,聞有霉味,發(fā)現(xiàn)有的玉米粒表面長有白色綿絲狀物;粉碎的剩余玉米也有霉味。
原分離培養(yǎng)
取玉米粒和混合飼料樣,0.1%升汞消毒1min,無菌蒸餾水沖洗,然后將樣品分別無菌接種于加有抗菌素的卡貝克(czapek)瓊脂培養(yǎng)基平皿各5個,另設(shè)3個無菌蒸餾水對照培養(yǎng)基平皿,25~28℃培養(yǎng)72h。接樣培養(yǎng)基都長有白色絨絲狀物,取培養(yǎng)物涂片,乳酸酚棉藍染色鏡檢,見有分隔菌絲和孢子,大分生孢子呈鐮刀狀、中間有2~5個隔,小分生孢子多為卵圓形細胞;而對照培養(yǎng)基平皿均未見類似菌落。
毒素檢測
隨機抽取玉米樣和混合飼料樣,玉米赤霉烯酮毒素提取和氣相色譜測定參考文獻的方法進行。測得玉米樣和混合飼料樣中玉米赤霉烯酮的含量分別為2.51mg/kg和1.85mg/kg。挑取上述病原分離培養(yǎng)物,以pH8.0的PBS液稀釋,用0.3μm濾膜過濾除菌,將少量過濾液接種到長成單層的PK15細胞上,36h后,細胞質(zhì)濃縮、顆粒化,核濃縮、碎裂、液化,細胞呈中毒樣病變;而未接種過濾液的細胞生長正常。根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、實驗室檢查,初步診斷為鐮刀菌引起的豬玉米赤霉烯酮中毒。