用流產(chǎn)胎兒胃內(nèi)容物或陰道分泌物等材料制成菲薄的涂片,干燥、火焰固定后,用沙黃一孔雀綠染色法染色,布魯氏菌被染成淡紅色、小球狀桿菌,其他細(xì)菌或細(xì)胞為綠色或藍(lán)色。也可觀察其培養(yǎng)特性。
小動物感染試驗(yàn):應(yīng)用豚鼠接種分離的布魯氏菌,比用培養(yǎng)基分離可靠,因病料內(nèi)細(xì)菌不多時,用培養(yǎng)基分離培養(yǎng)常不能生長。正式試驗(yàn)時,取子宮分泌物、乳汁流產(chǎn)胎兒胃內(nèi)容物、羊水、精液或病變組織,制成混懸液等,給2只體重350 - 400g的豚鼠皮下或腹腔接種,一般為0.5-1.0 - 2.0mL,接種后第2周開始采血,以后,每隔7-10d采血1次,檢查血清抗體,如凝集價達(dá)1:5以上時,即認(rèn)為是陽性反應(yīng),證明已感染了布魯氏菌,此時,可從豚鼠心血中分離培養(yǎng)細(xì)菌,即使分離不到細(xì)菌,也可判為已感染布魯氏菌。通常一只在接種后第三周剖殺,另一只在第6周剖殺,如見到鼠蹊淋巴結(jié)與腰下淋巴結(jié)腫大,脾腫大、表面粗糙,有結(jié)節(jié)狀病灶,肝臟有灰白色細(xì)小平坦的壞死小結(jié)節(jié),更可進(jìn)一步證實(shí)試驗(yàn)的陽性結(jié)果;若注射的豚鼠不發(fā)病,剖檢無病變,臟器分離培養(yǎng)陰性,可報告陰性。如為公豚鼠,腹腔接種時,可引起睪丸炎。如在接種后第3個月末,豚鼠不發(fā)病,未死亡,血清反應(yīng)仍陰性,可報告為陰性。
(二)血清學(xué)試驗(yàn)
1.凝集反應(yīng) 動物感染布魯氏菌的4-5d后,血液中即出現(xiàn)凝集素,隨后凝集滴度逐漸增高,能持續(xù)1-2年或更久,以試管凝集反應(yīng)檢查時,豬在1:50達(dá)“++”或“++"以上者,判為陽性反應(yīng),在1: 25達(dá)“++”時為疑似反應(yīng)。大群檢疫時,為提高效率,可用玻板凝集反應(yīng),豬血清在0.04mL處凝集,判為陽性反應(yīng);在0.08mL處凝集時,判為疑似反應(yīng)。
判為可疑的豬,3-4周后應(yīng)采血重檢,如仍為可疑反應(yīng)??砂匆韵虑闆r來確定,即該群中既無本病的流行病情況發(fā)生,也無臨床病例出現(xiàn),血檢也無陽性時,則可判為陰性反應(yīng)。
2.虎紅平板凝集反應(yīng) 虎紅布魯氏菌有色抗原呈酸性,且具有緩沖作用,并能抑制引起非特異性反應(yīng)的IgM的活性和增強(qiáng)特異性IgG的活性,使反應(yīng)的敏感性提高,特異性優(yōu)于常規(guī)試管凝集反應(yīng)。檢驗(yàn)時,取被檢血清與虎紅抗原各0.03mL,滴加于平板上混勻,放置4 - 10min觀察結(jié)果二只要有凝集現(xiàn)象出現(xiàn),即可判為陽性反應(yīng)。
3.其他方法‘熒光抗體染色法、間接炭凝集反應(yīng)、間接紅細(xì)胞凝集反應(yīng)、協(xié)同凝集試驗(yàn)、特異性花結(jié)吸附染色、酶標(biāo)SPA染色、二巰基乙醇(2-ME)凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、細(xì)胞免疫檢查法、乳汁環(huán)狀反應(yīng)、熱凝集反應(yīng)、凝膠電泳法等均可用于布魯氏菌病的診斷。閻守敦等(1990)應(yīng)用凝膠電泳法來鑒別布氏桿菌的人工感染和疫苗接種。近年來,間接血凝試驗(yàn)、抗球蛋白(Coombs)試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、熒光抗體法、DNA探針以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等新的方法逐漸被用于本病診斷或檢疫。