1.實驗動物接種 乳鼠對蓋他病毒甚為易感。一般采集病死乳豬的腦、肺、腎、扁桃體等組織,制成1:10懸液,反復凍融后離心,取上清液接種于1-2日齡乳鼠腦內,觀察死亡情況。同時用已知陽性和陰性血清做中和試驗。
2.病毒分離 采集病死乳豬的適宜組織,制備1:10懸液,離心取上清液,接種BHK-21、豬胚腎、豬腎、倉鼠肺或非洲綠猴腎細胞做細胞培養(yǎng),經1-2d即能看到明顯的細胞病變,可判為陽性。如有懷疑,可以盲傳2代,無致細胞病變作用即可判為陰性。
3.血清學檢驗
(1)血凝抑制試驗:日本已有市售診斷用試劑盒,可按常規(guī)方法做微量血凝抑制試驗。試驗前待檢血清需除去非特異性因素,方法是將血清先用丙酮處理,再用鵝紅細胞吸附,最后在56℃滅活30min 。試驗過程:抗原與血清混合后在4℃過夜,加0.33%鵝紅細胞混合,于37℃作用1h觀察結果,血清的血凝滴度(HI)在1:10以上,即判為陽性。
(2)酶聯免疫吸附試驗:抗原由蓋他病毒感染的細胞培養(yǎng)液濃縮和純化。檢測方法按常規(guī)進行,檢測的敏感性與血凝抑制試驗基本一致。